雷帕霉素及雷帕霉素靶蛋白小干扰RNA对高体积分数氧诱导的早产鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡和细胞外基质的影响

摘要：目的 探讨雷帕霉素及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白小干扰RNA(mammalian target of rapamycin-small interfering RNA,mTOR siRNA)对高体积分数氧(高氧)诱导的早产鼠肺成纤维细胞增殖、凋亡及Ⅰ型胶原(collagenⅠ,COLⅠ)、Ⅲ型胶原(collagenⅢ,COLⅢ)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响.方法 采用900 mL/L体积分数的氧气制作高氧损伤细胞模型,将早产鼠肺成纤维细胞分为空气对照组、高氧组、高氧+雷帕霉素组和mTOR siRNA转染组,应用噻唑蓝(MTT)法评估细胞增殖,Annexin V-FITC和碘化丙啶(propidium lodide,PI)双染色法检测细胞凋亡;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测COLⅠ、COLⅢ和FN的水平,应用Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2和P53及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)和转化生长因子 β(transforming growth factorβ,TGF-β)的蛋白表达情况.结果 与空气对照组比,高氧组肺成纤维细胞增殖减少,凋亡增加,同时COLⅠ(28.30±0.53比17.43±0.37)、COLⅢ(27.86±1.02比17.43±0.37)和FN(32.87±0.42比21.57±0.47)含量及P53(0.810±0.119比0.160±0.018)、CTGF(0.590±0.017比0.220±0.007)和TGF-β(0.580±0.108比0.210±0.008)蛋白表达均增加,Bcl-2(0.150±0.004比0.600±0.130)蛋白表达减少,差异均有统计学意义(均P<0.01);雷帕霉素干预后与高氧组对比,肺成纤维细胞增殖增加,凋亡减少,COLⅠ(23.17±0.60比28.30±0.53)、COLⅢ(17.09±0.58比27.86±1.02)和FN(28.11±0.68比32.87±0.42)含量及P53(0.430±0.008比0.810±0.119)、CTGF(0.040±0.006比0.590±0.017)和TGF-β(0.380±0.008比0.580±0.108)蛋白表达均减少,Bcl-2(0.290±0.009比0.150±0.004)蛋白表达增加,差异均有统计学意义(均P<0.01);mTOR siRNA转染组较高氧+雷帕霉素组比,肺成纤维细胞增殖增加,凋亡减少,COLⅠ(15.71±0.34比23.17±0.60)、COLⅢ(13.85±1.36比17.09±0.58)和FN(20.18±0.28比28.11±0.68)含量及P53(0.300±0.006比0.430±0.008)、CTGF(0.140±0.004比0.040±0.006)和TGF-β(0.150±0.002比0.380±0.008)蛋白表达均减少,Bcl-2(0.460±0.012比10.290±0.009)蛋白表达增加,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 雷帕霉素及mTOR siRNA均可保护早产鼠高氧导致的肺损伤,且对肺纤维化有一定的抑制作用,mTORsiRNA效果更明显,其机制可能是通过抑制mTOR信号通路.