达努塞替通过极光激酶B/核糖体p7OS6蛋白激酶/核糖体蛋白15信号通路调控白血病细胞自噬

摘要：目的 探索达努塞替处理人白血病细胞后极光激酶B/核糖体p70S6蛋白激酶/核糖体蛋白15(Aurora B/p70S6K/RPL15)信号通路的变化及细胞自噬的发生情况,并研究其作用机制.方法 选择髓系白血病细胞株THP-1和K562为研究对象.实验分为2部分,第1部分:分别采用0.1μmol/L、1.0μmol/L、5.0μmol/L浓度达努塞替共培养THP-1和K562细胞,对照组(0μmol/L达努塞替)加入体积分数为2 mL/L的二甲基亚砜(DMSO),以上各组均作用24h;采用四唑盐比色法检测细胞生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞自噬情况,Western blot法检测p70S6K、Aurora B、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、微管相关蛋白(LC3)、Beclin1、核糖体蛋白15(RPL15)的表达水平.第2部分:分别下调THP-1和K562细胞中Aurora B和RPL15,采用DMSO溶解达努塞替(5.0μmol/L),实验分组:DMSO组(空白对照组)、达努塞替处理组、空载质粒组、小干扰RNA (siRNA)组、空载质粒+达努塞替处理组和siRNA+达努塞替处理组.检测自噬信号通路PI3 K/AKT/mTOR中Aurora B、p70S6K、RPL15和自噬蛋白Beclin1、LC3的表达情况.结果 1.达努塞替可抑制THP-1、K562细胞生长,半抑制浓度分别为26.9 μmol/L和30.2 μmol/L.2.在THP-1和K562细胞中,0.1 μmol/L、1.0 μmol/L、5.0 μmol/L浓度的达努塞替处理细胞后,p-Aurora B/Aurora B、p-p70S6K/p70S6K、RPL15、p-mTOR/mTOR、p-AKT/AKT蛋白表达水平均较对照组降低,差异均有统计学意义(均P＜0.05);自噬蛋白Beclin1、LC3表达量及细胞自噬率均升高,差异均有统计学意义(均P＜0.05).3.THP-1细胞中,下调Aurora B后,siRNA组及siRNA+达努塞替处理组p70S6K、RPL15分别低于空载质粒组22.1％、61.3％ (F=18.1,P=0.001)和55.4％、56.1％(F=19.4,P=0.001);LC3表达量较空载质粒组升高13.6％、17.1％ (F=15.4,P=0.001).下调RPL15后,siRNA组及siRNA+达努塞替处理组Beclin1、LC3分别高于空载质粒组39.5％、92.3％ (F =25.2,P=0.001)和40.2％、58.3％ (F =23.9,P=0.001).K562细胞,下调Aurora B后,siRNA组及siRNA+达努塞替处理组p70S6K、RPL15分别低于空载质粒组24.2％、62.7％(F=20.4,P=0.001)和57.2％、60.1％ (F=23.9,P=0.001);LC3表达量较空载质粒组增加17.9％、56.7％(F=20.9,P=0.001).下调RPL15后,siRNA组及siRNA+达努塞替处理组Beclin1、LC3分别高于空载质粒组20.6％、98.4％(F=22.4,P=0.001)和41.5％、70.1％ (F=26.2,p=0.001).结论 达努塞替可能通过影响PI3 K/AKT/mTOR自噬通路来抑制THP-1、K562白血病细胞的增殖,还可负性调控Aurora B/p70S6K/RPL15信号通路引起细胞发生程序性死亡,其中RPL15可能是Aurora B/p70S6K/RPL15信号通路中抑制肿瘤增殖作用的关键靶点.