小干扰 RNA 沉默 CD40基因对自身免疫性心肌炎大鼠 Th1/Th2与 Th17/Treg 平衡的影响

摘要：目的：通过建立自身免疫性心肌炎（EAM）大鼠模型，探讨小干扰 RNA（siRNA）沉默 CD40基因后对 EAM 大鼠外周血 Th1/ Th2与 Th17/ Treg 平衡的影响。方法采用随机数字表法将 Lewis 大鼠分为正常对照组、EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组。第0天和第7天，EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠注射猪心肌肌球蛋白建立 EAM 模型。第7天，CD40 siRNA 治疗组大鼠予 CD40 siRNA 治疗。观察各组大鼠基本情况，于第21天记录各组大鼠心电图及超声心动图后处死大鼠，观察心肌组织病理变化并计算病理学积分，应用 ELISA 法检测大鼠外周血干扰素（IFN）-γ、IL-4、IL-17及转化生长因子（TGF）-β水平。结果1. EAM组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠 EAM 的总体发病率为100%，且在第0天至第21天均无死亡。2.正常对照组与 CD40 siRNA 治疗组大鼠心电图均正常，EAM 组与 siRNA 组大鼠仅2例出现期前收缩。3. EAM组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠超声心动图均异常，表现为左心室扩大、左心室壁肥厚、心肌动度减低、心功能明显降低、心包积液。CD40 siRNA 治疗组大鼠左心室短轴收缩率（LVFS）和左心室射血分数（LVEF）显著高于 EAM 组[（46.70±8.25）%比（34.28±11.81）%，（80.92±11.76）%比（64.03±12.60）%]，差异均有统计学意义（F ＝0.652、0.234，P 均﹤0.05）。4. EAM 组、CD40 siRNA 治疗组及 siRNA 对照组大鼠心肌组织病理检查显示心肌纤维断裂、心肌细胞坏死及炎性细胞浸润。CD40 siRNA 治疗组心肌组织病理学积分明显低于EAM 组（2.10±1.07比3.40±0.72），差异有统计学意义（F ＝1.290，P ﹤0.05）。5.与正常对照组比较，EAM组大鼠外周血 IFN-γ、IL-4、IL-17及 TGF-β水平均显著升高[（1245.55±244.56）ng/ L 比（501.53±18.93） ng/ L，（78.03±10.47）ng/ L 比（30.77±1.74）ng/ L，（80.82±13.33）ng/ L 比（27.98±3.01）ng/ L，（156.27±12.11）ng/ L 比（4.33±0.79）ng/ L]，差异均有统计学意义（ t ＝7.408、10.764、9.250、30.608，P 均﹤0.05）， CD40 siRNA 治疗组大鼠外周血 IFN-γ与 IL-17水平较 EAM 组显著降低[（940.62±128.40） ng/ L 比（1245.55±244.56）ng/ L，（60.42±12.40）ng/ L 比（80.82±13.33）ng/ L]，差异均有统计学意义（t ＝2.704、2.745，P 均﹤0.05），IL-4与 TGF-β水平显著升高[（97.91±13.62）ng/ L 比（78.03±10.47）ng/ L，（178.84±12.10）ng/ L 比（156.27±12.11）ng/ L]，差异均有统计学意义（t ＝2.835、3.229，P 均﹤0.05）。结论 CD40 siRNA 可明显减轻 EAM 大鼠心肌炎症，改善心功能，其机制可能与其降低 Th1与 Th17相关细胞因子水平，上调 Th2与 Treg 相关细胞因子的水平，从而纠正 Th1/ Th2与 Th17/ Treg 失衡有关。