期刊简介

               《中华实用儿科临床杂志》(原《实用儿科临床杂志》)是由中国科学技术协会主管、中华医学会主办的中华医学会系列杂志,是以儿科临床与基础研究为主要报道内容的儿科学类核心期刊。本刊为儿科学类核心期刊、中国科技论文统计源期刊(中国科技核心期刊),RCCSE中国核心学术期刊,中国科学引文数据库(CSCD)来源期刊,中国科学技术协会精品科技期刊,被中国生物医学文献数据库(CBMdisc)、Quick全文资料管理系统(FTME)、中文科技期刊数据库、万方数据、《中国学术期刊文摘》、美国《化学文摘》、俄罗斯《文摘杂志》、波兰《哥白尼文摘》、W HO西太平洋地区医学索引(W PRIM)、美国《乌利希斯期刊指南》等国内外数十家权威数据库收录。本刊以贯彻党和国家的卫生工作方针、政策,贯彻理论与实践、普及与提高相结合的方针,反映国内外儿科医疗、科研等方面的新理论、新技术、新成果、新进展,促进学术交流为办刊宗旨。辟有述评、专家论坛、学术争鸣、热点、论著、小儿神经基础与临床、中西医结合、实验研究、儿童保健、误诊分析、药物与临床、综述、小儿外科、病例报告、临床应用研究、儿科查房、标准•方案•指南、指南解读、国际期刊快通道、医学人文等栏目。以各级医院儿科医务工作者,各高等医学院校、科研院所儿科医教研人员,各级图书馆(室)、科技情报研究院(所)研究人员等为读者对象。欢迎广大儿科医务工作者和医学科教研人员踊跃投稿。本刊为半月刊,A4开本,80页,无光铜版纸印刷,每月5日、20日出版。CN 10-1070/R,ISSN 2095-428X,CODEN SELZBJ,Dewey #:618.92。国内外公开发行,国内邮发代号:36 - 102,国外邮发代号:SM1763。可通过全国各地邮局订阅,也可与本刊编辑部直接联系订阅邮购。国内定价:10.00元/期,240.00元/年;国外定价:10.00美元/期,240.00美元/年。欲浏览本刊或有投稿意向,请登录本刊网站(http://www.zhsyeklczz.com),网站提供免费全文下载。联系地址:453003河南省新乡市金穗大道601号新乡医学院《中华实用儿科临床杂志》编辑部。联系电话:0373 -3029144,0373 -3831456;传真:0373-3029144;电子信箱 syqk@ chinajournal.net.cn。请优先登录中华医学会杂志社网站(http://www.medline.org.cn)首页的“稿件远程管理系统”投稿。                

首页>中华实用儿科临床杂志
  • 杂志名称:中华实用儿科临床杂志
  • 主管单位:中国科学技术协会
  • 主办单位:中华医学会
  • 国际刊号:2095-428X
  • 国内刊号:10-1070/R
  • 出版周期:半月刊
期刊荣誉:中国科技论文统计源期刊期刊收录:北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
中华实用儿科临床杂志2013年第24期

沉默表达miR-26a A549细胞株的构建

梁宏露;张盼;张晓群;杨洋;邱洁;阚清;周晓光;周晓玉

关键词:miR-26a, A549细胞株, 慢病毒载体
摘要:目的 构建稳定沉默表达miR-26a的人肺腺癌细胞株(A549).方法 体外合成成熟的人miR-26a-5p(Hsa-miR-26a-5p)特异性互补序列,在片段两侧添加Age I、EcoRI酶切位点,与经双酶切后的GV280载体连接,构建GV280-miR-26a-down慢病毒载体.应用DNA测序对此重组载体进行鉴定.将GV280-miR-26a-down慢病毒载体与病毒包装质粒pGC-LV载体、pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染293T细胞,包装产生慢病毒.依据293T细胞绿色荧光蛋白的表达量确定病毒滴度.将沉默表达miR-26a的慢病毒转染A549细胞,嘌呤霉素筛选后获得稳定细胞株.应用Western blot法检测miR-26a一个靶基因SMAD1的表达情况,验证此细胞株的功能.结果 经DNA测序鉴定,成功构建了GV280-miR-26a-down慢病毒载体.在293T细胞中将该载体包装成慢病毒,测定病毒滴度为2×1012 TU/L.重组慢病毒转染A549细胞的效率高达95%,用2.5 mg/L嘌呤霉素筛选2周后几乎100%的A549细胞表达GFP.Western blot结果显示miR-26a的靶基因SMAD1的表达量在miR-26a沉默组比空载病毒组和空白对照组明显上调.结论 成功构建了GV280-miR-26a-down慢病毒载体,并构建稳定沉默表达miR-26a的A549细胞株,为后续研究奠定了基础.