缺氧缺血未成熟新生鼠脑少突胶质细胞髓鞘化障碍致脑白质损伤的作用

摘要：目的 观察缺氧缺血(HI)新生大鼠脑白质损伤时少突胶质细胞(OLs)的作用.方法 将48只出生3d的清洁级SD大鼠分为实验组和对照组.实验组大鼠分离右侧颈总动脉、结扎离断,缺氧处理；对照组大鼠分离右侧颈总动脉,不结扎离断,也不进行缺氧处理.术后3d、7d、14 d心脏灌注后取其脑组织,各时间点实验组与对照组分别标记为A1/A2,B1/B2,C1/C2.处死大鼠的前24 h腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brdu),每4h1次,连续注射3次.脑组织经固定、脱水处理后冷冻切片.对脑组织切片进行焦油紫(CV)染色,评估脑白质损伤情况.行神经元-神经胶质2型抗原(NG-2)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、Urdu、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)的免疫组织化学染色,观察缺氧缺血性脑损伤新生大鼠OLs的作用.结果 1.CV染色显示脑面积比率:A,组损伤侧与损伤对侧脑面积比率为0.900±0.059、A2组左侧与右侧脑面积比率为0.970±0.015、B1组损伤侧与损伤对侧脑面积比率为0.870±0.039、B2组左侧与右侧脑面积比率为0.920±0.024、C1组损伤侧与损伤对侧脑面积比率为0.730±0.096、C2组左侧与右侧脑面积比率为0.920 ±0.039,实验组和对照组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).胼胝体面积比率:A1组损伤侧与损伤对侧胼胝体面积比率(0.870±0.028)和A2组左侧与右侧胼胝体面积比率(0.910±0.033)比较差异有统计学意义(P=0.049).B1组损伤侧与损伤对侧胼胝体面积比率(0.92 ±0.030)和B2组左侧与右侧胼胝体面积比率(0.92±0025),C1组损伤侧与损伤对侧胼胝体面积比率(0.83 ±0.130)和C2组左侧与右侧胼胝体面积比率(0.85±0.076)比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).2.MBP染色:阳性面积占整个胼胝体的比率:B1组损伤侧和损伤对侧为0.32±0.17、0.39±0.20;B2组左右两侧阳性面积占整个胼胝体面积比率为0.51±0.11；C1组损伤侧和损伤对侧为0.71±0.07、0.90±0.10；C2组左右两侧阳性面积占整个胼胝体面积比率为0.88±0.13,各个时间点实验组损伤侧和损伤对侧、实验组和对照组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).3.NG-2染色:每高倍镜下阳性细胞数:A1组损伤侧和损伤对侧为23.56±2.93、18.11±3.19;A2组左右两侧20.17±2.38；B1组损伤侧和损伤对侧为27.29 ±4.81、22.88±5.31,B2组左右两侧20.81±3.24；C1组损伤侧和损伤对侧为22.29±4.27、16 04±4.17;C2组左右两侧14.07±3.29.各个时间点实验组损伤侧和损伤对侧、实验组和对照组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05).4.Caspase-3染色:每高倍镜下陌性细胞数:A1组损伤侧和损伤对侧为68.67±6.60、60.04±5.66；A2组两侧40.21±7.93;B1组损伤侧和损伤对侧为59.13± 10.22、50.38±11.58;B2,组两侧为48.17±4.27;C1组损伤侧和损伤对侧为70.13±16.11、57.00±15.43;C2组两侧62.42±13.56.各个时间点实验组损伤侧和损伤对侧、术后3d、7d实验组和对照组间差异均有统计学意义(Pa＜0.05).5.Brdu 染色:每高倍镜下阳性细胞数:A1组损伤侧和损伤对侧为149.58±21.12、126.92±7.23；A2组两侧为120.33±7.18；B1组损伤侧和损伤对侧为89.04±20.42、79.79±16.77,B2组两侧为85.83±6.05;C1组损伤侧和损伤对侧为60.08±10.89、53.25±8.02;C2组两侧为50.08±4.78.术后3 d、7d实验组损伤侧和损伤对侧、实验组和对照组间比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05).结论 HI可引起OLs成熟、髓鞘形成障碍,导致脑的低髓鞘化,从而引起脑白质损伤OLs是缺氧缺血性脑损伤的靶细胞.