胰岛素对脂多糖诱导的 H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其机制

摘要：目的：观察胰岛素（IN）对脂多糖（LPS）诱导的 H9c2心肌细胞损伤的保护作用，并探讨解偶联蛋白2（UCP2）在其过程中的可能作用。方法采用随机对照分组的方法，把 H9c2心肌细胞培养24 h 后随机分为对照组、LPS 刺激组（LPS 组）、LPS ＋70 IU/ L 胰岛素组（IN 70 IU/ L 组）、LPS ＋350 IU / L 胰岛素组（IN 350 IU/ L 组）和 LPS ＋700 IU/ L 胰岛素组（IN 700 IU/ L 组）5组，胰岛素处理组于 LPS 刺激前15 min 加入相应剂量胰岛素，对照组加入与 LPS 等量的9 g/ L 盐水。然后 LPS 组和胰岛素处理组都接受 LPS 处理24 h。处理结束后检测乳酸脱氢酶（LDH）水平、丙二醛（MDA）水平、总超氧化物歧化酶（SOD）活力以及比色法检测细胞内活性氧（ROS）水平；细胞活力检测试剂盒检测细胞活力；实时反转录聚合酶链反应及蛋白印迹法分别检测 UCP2基因转录及蛋白表达。结果与对照组比较，LPS 组 LDH 水平、细胞内 MDA 及 ROS 水平均显著升高[LDH：（829.3±75.3）U/ L 比（223.5±23.6）U/ L，MDA：（60.90±5.73）nmol/ mgprot 比（19.70±1.99）nmol/ mgprot， ROS：（410.2±81.6）U/ well 比（94.3±18.5）U/ well，P 均﹤0.05]，细胞活力和 SOD 活力均降低[细胞活力：0.822±0.058比1.012±0.023，SOD：（49.20±5.81）U/ mgprot 比（89.80±2.57）U/ mgprot，P 均﹤0.05]，UCP2 mRNA 和 UCP2蛋白表达均升高（1.867±0.130比1.028±0.097，0.288±0.018比0.180±0.008，P 均﹤0.05）；与 LPS 组比较，350 IU/ L 和700 IU/ L 胰岛素预处理可降低细胞上清 LDH 水平、细胞内 MDA 和 ROS 水平[LDH：（568.2±35.7）U/ L、（622.8±27.6）U/ L 比（829.3±75.3）U/ L，MDA：（29.20±4.20）nmol/ mgprot、（42.10±2.32）nmol/ mgprot 比（60.90±5.73）nmol/ mgprot，ROS：（270.3±46.8）U/ well、（301.5±16.9）U/ well比（410.2±81.6）U/ well，P 均﹤0.05]，使细胞活力和 SOD 活力上高[细胞活力：0.960±0.029、0.906±0.039比0.822±0.058，SOD：（75.20±2.21）U/ mgprot、（61.20±3.38）U/ mgprot 比（49.20±5.81）U/ mgprot，P 均﹤0.05]，UCP2 mRNA 和 UCP2蛋白表达均升高（3.830±0.265、2.855±0.215比1.867±0.130，0.464±0.215、0.355±0.006比0.288±0.018，P 均﹤0.05）。与70 IU/ L 组及700 IU/ L 组比较，350 IU/ L 组的保护作用更明显。结论胰岛素可降低 LPS 诱导的 H9c2心肌细胞氧化损伤，可能是通过上调受损心肌细胞内 UCP2的表达，从而发挥细胞保护作用。