期刊简介

               《中华实用儿科临床杂志》（原《实用儿科临床杂志》）是由中国科学技术协会主管、中华医学会主办的中华医学会系列杂志，是以儿科临床与基础研究为主要报道内容的儿科学类核心期刊。本刊为儿科学类核心期刊、中国科技论文统计源期刊（中国科技核心期刊），RCCSE中国核心学术期刊，中国科学引文数据库（CSCD）来源期刊，中国科学技术协会精品科技期刊，被中国生物医学文献数据库（CBMdisc）、Quick全文资料管理系统（FTME）、中文科技期刊数据库、万方数据、《中国学术期刊文摘》、美国《化学文摘》、俄罗斯《文摘杂志》、波兰《哥白尼文摘》、W HO西太平洋地区医学索引（W PRIM）、美国《乌利希斯期刊指南》等国内外数十家权威数据库收录。本刊以贯彻党和国家的卫生工作方针、政策，贯彻理论与实践、普及与提高相结合的方针，反映国内外儿科医疗、科研等方面的新理论、新技术、新成果、新进展，促进学术交流为办刊宗旨。辟有述评、专家论坛、学术争鸣、热点、论著、小儿神经基础与临床、中西医结合、实验研究、儿童保健、误诊分析、药物与临床、综述、小儿外科、病例报告、临床应用研究、儿科查房、标准•方案•指南、指南解读、国际期刊快通道、医学人文等栏目。以各级医院儿科医务工作者，各高等医学院校、科研院所儿科医教研人员，各级图书馆（室）、科技情报研究院（所）研究人员等为读者对象。欢迎广大儿科医务工作者和医学科教研人员踊跃投稿。本刊为半月刊，A4开本，80页，无光铜版纸印刷，每月5日、20日出版。CN 10-1070/R，ISSN 2095-428X，CODEN SELZBJ，Dewey #：618.92。国内外公开发行，国内邮发代号：36 - 102，国外邮发代号：SM1763。可通过全国各地邮局订阅，也可与本刊编辑部直接联系订阅邮购。国内定价：10.00元/期，240.00元/年；国外定价：10.00美元/期，240.00美元/年。欲浏览本刊或有投稿意向，请登录本刊网站（http：//www.zhsyeklczz.com），网站提供免费全文下载。联系地址：453003河南省新乡市金穗大道601号新乡医学院《中华实用儿科临床杂志》编辑部。联系电话：0373 -3029144，0373 -3831456；传真：0373-3029144；电子信箱 syqk@ chinajournal.net.cn。请优先登录中华医学会杂志社网站（http：//www.medline.org.cn）首页的“稿件远程管理系统”投稿。                

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  • 杂志名称：中华实用儿科临床杂志
  • 主管单位：中国科学技术协会
  • 主办单位：中华医学会
  • 国际刊号：2095-428X
  • 国内刊号：10-1070/R
  • 出版周期：半月刊
期刊荣誉：中国科技论文统计源期刊期刊收录：北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 万方收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 哥白尼索引(波兰), 知网收录(中), 上海图书馆馆藏, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 维普收录(中), 国家图书馆馆藏, CA 化学文摘(美)
中华实用儿科临床杂志2015年第03期

卡介苗热休克蛋白70基因转染人原代白血病细胞瘤苗的制备及其抗瘤机制

李晓玲；刘春雷；孙立荣

关键词：卡介苗, 热休克蛋白70, 白血病细胞, 肿瘤疫苗
摘要：目的 通过体外培养白血病细胞,制备膜表面表达卡介苗(BCG)热休克蛋白70 (HSP70)瘤苗,研究其抗瘤作用和机制.方法 含重组人干细胞因子(SCF)、重组人flt-3配体(FL)、白细胞介素(IL)-3和IL-6的无血清培养液Stemspan@体外培养急性髓系白血病(AML)细胞,含SCF、FL、IL-3和IL-7的无血清的改良Iscove培养基(IMDM)体外培养B系急性淋巴细胞白血病(B-ALL)细胞,通过观察细胞生长形态和免疫表型测定验证培养的白血病细胞.利用脂质体2000将重组载体pDisplay-HSP70转染到已被鉴定的白血病细胞,免疫荧光单克隆抗体进行细胞表面修饰鉴定.对转染后的白血病细胞免疫原性进行检测:实验组分为未进行转染的白血病细胞组(wt-LC组),转染空载体pDisplay的白血病细胞组(pDisplay-LC组)及转染重组载体pDisplay-HSP70的白血病细胞组(HSP70-LC组).收获各组细胞,与自体外周血T淋巴细胞混合培养72 h,羟基荧光素双乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞术测定淋巴细胞增殖指数,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测干扰素(IFN)-γ水平;各组白血病细胞与T淋巴细胞混合培养6d后,加入新鲜白血病细胞(效∶靶分别为10∶1、20∶1、40∶I、80∶1)共培育12 h,乳酸脱氢酶(LDH)释放改良法检测细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的杀伤活性.结果 短期培养的白血病细胞呈集落样悬浮生长,并保持增殖特性;1～10d细胞增殖较快,以后逐渐变慢.对培养10 d的细胞进行免疫表型测定,AML细胞的CD13、CD33表达与培养前比较差异无统计学意义(P＞0.05);B-ALL细胞的CD19、CD10、CD22表达与培养前比较差异无统计学意义(P＞0.05).共聚焦显微镜观察证实BCG HSP70表达在转染后的白血病细胞表面.转染后的白血病细胞免疫原性检测结果:(1)自体淋巴细胞增殖:HSP70-LC组CFSE阳性率明显高于wt-LC组和pDisplay-LC组(t=17.89、19.58,P均＜0.05),pDisplay-LC组与wt-LC组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)细胞因子水平:HSP70-LC组IFN-γ水平明显高于wt-LC组和pDisplay-LC组(t=24.72、24.81,P均＜0.05).(3) CTL杀伤活性:固定效∶靶比例,与实验wt-LC组、pDisplay-LC组比较,HSP70-LC组能明显提高CTL的杀伤活性(F=13.66,P＜0.05);当效∶靶从10∶1至80∶1,HSP70-LC组组内CTL细胞杀伤活性逐渐增强(F=19.69,P＜0.05).结论 体外成功培养人原代急性白血病细胞,短期培养可以明显增加细胞数量,且对细胞表面抗原表达影响不大,能维持其生物学特性.成功制备膜表面表达BCG HSP70的白血病细胞瘤苗,且BCG HSP70基因转染后能明显增强白血病细胞的免疫原性.

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